数字PCR | 法国Stilla Technolgies公司三色Crystal微滴数字PCR系统在液态活检领域有突出贡献，该公司发表声明将推出全新的6 -通道系统

法国Stilla Technologies公司三色Crystal微滴数字PCR系统在液态活检领域有突出贡献，该公司发表声明将

推出全新的6 -通道系统

2017年9月8日| 莫利卡·阿什福德

美国，纽约(GenomeWeb)——法国Stilla Technologies公司去年推出了一款新型的全自动微滴芯片数字PCR仪系统，具有独特的三色检测通道，目前正在全球热销中。

据该公司总裁兼创始人Rémi Dangla介绍，Stilla公司的Crystal 数字PCR两大重要客户群体为：1、新接触数字PCR技术的用户，这些用户非常熟悉核酸定量方法但刚开始使用数字PCR技术，对于Stilla技术平台提供与qPCR操作类似的易用性，和与其他同类仪器相比，更快速地获得结果非常满意。2、对数字PCR技术非常熟悉的用户，这些用户已经有了其他同类系统，决定采购Crystal平台的原始是非常迫切地需要更多的检测通道。

Dangla表示，Crystal 三色检测数字PCR系统可应用在不同分子研究领域，但对于进行液态活检研究的用户来说，这是一项特别令人兴奋的技术。上月底，Stilla Technologies公司和欧洲最大的癌症研究中心法国Gustave Roussy研究所为联合作者在PLoS One上发表的文章正是液态活检的研究。

PCR方法，特别是数字PCR方法，作为一种不需要组织活检就能通过cfDNA（游离DNA）进行癌症检测或监控的方法，在液态活检领域得到了广泛的应用。

例如，在肺癌中，临床医生已经开始采用多种PCR技术检测EGFR活化突变和耐药突变，为使用一代、二代和三代EGFR 酪氨酸激酶抑制剂（TKI）进行治疗的患者带来诸多益处。

Stilla和Gustave Roussy的作者们发表在PLoS One上的文章中指出，在法国最新提出的建议中，认为在非小细胞肺癌中进行基于血液的EGFR突变检测，对于不能进行组织分析的患者是非常值得推荐的替代选择，同时在EGFR-TKI治疗上取得疗效的患者，也是一种评估耐药突变的方法。

在美国，罗氏公司基于Cobas PCR的EGFR突变检测成为美国FDA去年批准的首个液体活检检测。

但是某些机构已经规避了FDA批准的新技术平台，比如Bio-rad的微滴数字PCR，Johns Hopkins大学开发的BEAMing技术或NGS下一代靶向测序等。

在Gustave Roussy的研究中，研究人员将Stilla的系统(即Crystal数字PCR，由于微滴自主排列成六形，与水晶的形状相似)与Thermo Fisher公司的Ion Torrent测序平台结果比较，检测来自60名晚期非小细胞肺癌患者的EGFR突变样本。

Stilla公司的Crystal Digital PCR方法依赖于Sapphire芯片作为耗材，这种芯片可以在Naica Geode微滴生成/扩增系统上运行。Naica平台先生成2D单层平铺的液滴阵列，然后进行PCR热循环，最后使用荧光显微镜在三个不同的荧光通道中成像。

Dangla解释说，三色荧光通道允许用户同时检测三个不同的目标DNA，而不会产生其他数字PCR平台在进行多重检测方法时的负面影响，如同一通道中不同目标DNA时的竞争作用，扩增效率不同导致的影响等。

在他们的研究中，Gustave Rousy团队设计了多重检测方法，用于对含量极低的EGFR-活化突变位点和EGFR-TKI耐药突变位点以及EGFR-WT野生型位点进行平行检测和定量。

将Naica crystal 全自动微滴芯片数字PCR仪系统中获得的结果与测序结果进行比较，研究人员计算出，三色Crystal 数字PCR方法与测序的结果的符合性约为78%，但是在灵敏度方面不一致，Crystal 数字灵敏度优于测序方法。用Crystal数字PCR方法检测了7例EGFR活化突变和4例EGFR耐药突变，但测序方法未检测到。

同时，该小组对6个患者的这两种突变类型进行了长期监测，发现循环DNA突变水平与患者的临床疾病状态有明显的相关性。

Dangla认为这篇文章是三色荧光检测通道在临床应用价值的最有力的证明。

研究中写道，与所有PCR方法一样，相较于测序方法的open-ended分析方法，Crystal Digital方法最适合检测已知突变。

就肺癌而言，Gustave Roussy研究所的研究人员写道，可能检测到几个其他的生物标记物，例如HER 2和MET扩增，这些生物标记物也可能导致产生TKIs耐药性。

Dangla本周恰巧曾表示，Stilla已经将研发重点转向提高其技术的多通道检测能力，计划将荧光检测通道从3通道增加到6通道。

Dangla说：“当我们思考使用数字PCR进行多重通道检测的挑战时，其实问题并不在仪器上，而是分子生物学的问题。”

"我们必须考虑到不同反应间的竞争和目标分子之间的扩增效率额不同，”他解释说。 “但是我们在三色检测系统中得出的经验是，您不需要担心扩增效率，同时反应间的竞争也不是问题，原因在于大多数微滴中不会有多于一个的反应。"

Stilla的最大挑战在于实现一种容易进行六色荧光通道的读取装置，并进行合理设计达到易于使用。

该公司目前正在建造原型机，计划在明年第一季度或第二季度推出，可以与有兴趣的机构合作，进行系统性验证研究。

Filed Under

PCR Cancer NSCLC Gustav Roussy circulating tumor DNA EGFR

liquid biopsy multiplex PCR

扩展阅读

French Firm Stilla Technologies Unveils Three-Color 'Crystal Digital' PCR Platform

(GenomeWeb, 2016)

Life Tech Expands CastPCR Mutation Detection Assays to Include 21 Additional Cancer Genes

( GenomeWeb, 2012)

Publications Demonstrate Multiplexing, Clinical Potential of RainDance Digital PCR Tech

(GenomeWeb, 2011)

RainDance Launches Digital PCR Platform; Claims Sensitivity, Operating Cost Superiority

(GenomeWeb, 2012)

As RainDance Readies to Place Digital PCR Systems, Early Users Weigh in on Platforms Potential

(GenomeWeb, 2013)

Bio-Rad to Ship ddPCR Automated Droplet Generator in September

(GenomeWeb, 2014)

Powered by

Privacy Policy. Copyright © 2017 GenomeWeb LLC.  All Rights Reserved.