Western Blot归一化讲座精彩内容提炼

期刊对Western Blot数据要求：

1. 内参和目的蛋白在同一张印迹膜上；

2. 最好选择膜染色进行总蛋白归一化；

3. 如果使用看家蛋白，需要提供看家蛋白表达稳定并且不受实验条件影响的证据；

4. 成像方法的线性范围需要提供。

看家蛋白一般常用于内参质控，整张膜上的唯一质控标准，但是看家蛋白一般表达量比较高，可能与目的蛋白不在一个线性范围内，影响定量；并且看家蛋白证明在多种实验条件下是会发生变化，例如：细胞融合，疾病和药物治疗等等，影响定量精准性。

总蛋白质控直接在膜上检测总蛋白，变异性小，误差小，动态范围更宽，使用整个泳道或泳道中大部分信号用于归一化，而不是单一的条带，例如JBC、Nature和Proteomics等期刊推荐使用总蛋白进行归一化。

Azure可提供一站式Western Blot归一化解决方案。

提供两种总蛋白染色试剂Azure Red和TotalStainQ进行膜染色和总蛋白归一化，AzureRed适合低丰度表达样品，TotalStain更适合细胞裂解液样品。

Azure Sapphire双模式多光谱激光成像系统和Azure Imager多功能分子成像系统可进行总蛋白归一化，成像更简单，归一化更方便。

Azure成像系统除了可进行Western Blot成像外，功能非常强大，可进行凝胶、In cell Western孔板成像、2D和2D-DIGE、微阵列芯片、切片、动植物组织、小鼠成像、放射性同位素磷屏成像等。

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